鼠尾快速基因型鉴定
鼠尾快速基因型鉴定
- 产品详情
- 产品参数
产品价格
产品编号 | 规格 | 价格 |
BEENbio-MR002-1 | 200 rxns | 820 RMB |
BEENbio-MR002-2 | 500 rxns | 1640 RMB |
产品描述
BEENbio 鼠尾快速基因型鉴定试剂盒中包含的高效组织消化液（Lysis Buffer A 和增强型蛋白酶）能够迅速从小鼠尾巴、耳朵或脚趾等组织中释放足量的基因组DNA，消化时间仅需15分钟，无需抽提与纯化，可直接将消化产物作为模板加入抗干扰型2 x specific PCR Mix中进行PCR扩增，PCR扩增产物可直接点样进行电泳观察。实验操作简便而省时。
产品特性
项目 | 特性 |
适用范围 | 小鼠基因型鉴定（尾巴、耳朵或脚趾） 小鼠基因组DNA扩增、测序 |
储存条件 | Lysis Buffer A 4℃保存，其余组分-20℃保存。保质期2年。 |
储存条件
Lysis Buffer A 4℃保存，其余组分-20℃保存。保质期2年。
产品组成
成分 | 200 Rxns | 500 Rxns |
Lysis Buffer A (mL) | 20 | 50 |
Protease Plus (mL) | 0.4 | 1 |
2 x Specific PCR Mix (mL) | 2 | 5 |
使用说明
组织消化
1.1. 按小鼠数量配制组织消化液，试剂比例如下：
成分 | 1 Sample |
Protease Plus | 2 uL |
Lysis Buffer A | 100 uL |
组织消化液现用现配，充分混匀后使用。
1.2. 向每个含有样本的EP管中加入100 μL新鲜组织消化液，55℃水浴/金属浴中消化15 min。组织消化时，务必将组织完全浸没于消化液中。消化完成后，组织外观上仍然完整，但足量的基因组DNA已经释放，不影响后续的PCR实验。
1.3. 将样本置于95℃水浴/金属浴中孵育5 min以灭活消化液中的蛋白酶活性。12000 rpm离心5分钟，取上清作为PCR模板。消化后的上清或连同组织的消化液可于-20℃保存三个月。
PCR扩增
2.1. PCR反应体系：
反应体系的配制最好于低温环境下（如冰浴）完成，以保证PCR扩增效率和扩增特异性。
PCR 反应组分 | 20 μL 反应体系(推荐使用) | 50 μL 反应体系 |
ddH2O | 8 | 21 |
Primer 1 (10 μM) | 0.5 | 1 |
Primer 2 (10 μM) | 0.5 | 1 |
模板（消化产物） | 1 | 2 |
2 x Specific PCR Mix | 10 | 25 |
注：模板体积和引物体积根据需要可以适当调整。
2.2. PCR反应条件：
温度 (℃) | 时间 | 循环数 |
94 | 5 min | 1 |
94 | 20 sec | |
50-65 | 30 sec | 30-40 |
72 | X min (2kb/min) | |
72 | 5 min | 1 |
PCR产物的3’端带有碱基A，可直接克隆至T载体，用于DNA测序。
2. 琼脂糖凝胶电泳
常见问题及对策
常见问题 | 可能原因 | 对策 |
样本组与阳性对照组均无扩增条带 | PCR反应条件设置不当 | 优化PCR反应条件
|
PCR引物质量问题 | 重新设计PCR引物 | |
样本组无扩增条带而阳性对照组正常 | 不当储存或长期储存引起试剂活性丧失 | 使用新鲜的试剂
|
组织消化不够充分 | 延长55℃消化时间至30 min | |
蛋白酶未被完全灭活 | 消化产物在95-100℃孵育5 min | |
存在非特异性扩增条带 | PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高 | 增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度 |
PCR引物错配 | 重新设计PCR引物 | |
配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久 | PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应 |
