Anti-Flag COIP 磁珠
Anti-Flag COIP 磁珠
- 产品详情
- 产品参数
Anti Flag COIP磁珠
产品价格
产品货号 | 规格 | 价格 |
Beenbio -PR002-0.4 | 0.4 mL | 1150 RMB |
Beenbio -PR002-1 | 1 mL | 1780 RMB |
Beenbio -PR002-5 | 5 mL | 6825 RMB |
产品描述
BEENbio Anti Flag COIP磁珠在大小为1um的纳米磁珠上供价结合了大量的小鼠Anti Flag单克隆抗体，与传统的Anti Flag COIP琼脂糖凝胶比较，抗体结合能力相同，背景更低，由于采用磁性分离，使得每次COIP可以节省40%的时间。
产品特性
项目 | 特性 |
抗体亚型 | 鼠源IgG1 |
抗体纯化方法 | Protein A 纯化制备 |
适用范围 | 免疫共沉淀（IP），Flag tag蛋白纯化 |
推荐使用体积 | COIP: 500μl 细胞裂解液 使用 10μL磁珠 |
融合蛋白结合容量 | 大于1.1 mg Flag tagged protein/mL 磁珠 |
储存条件 | 4oC，避光 |
储存条件
pH 6-8, 4oC长期稳定，禁止产品冻结。
使用说明
磁珠的准备
重悬Anti Flag 免疫磁珠，取10 μL加入到500 μL TBS，洗涤3次，分离磁珠，弃上清。
样品的结合（binding）
在上述沉淀中加入500 μL细胞裂解液，室温缓慢孵育2小时或者4°C条件下过夜，分离磁珠，弃上清。
注意：结合过程中，磁珠可能会出现聚团或呈片状，属于正常现象，不会影响实验结果。
洗涤（washing）：0.5 mL TBS缓冲液洗涤四次，每次5min，分离磁珠，弃上清。
洗脱（elution）:上述所得沉淀中加 入50 μL 1×蛋白上样缓冲液，煮沸5 min，冷却后分离磁珠，吸取上清液，进行SDS-PAGE检测。
Anti Flag COIP 磁珠缓冲液汇总 | |
细胞裂解液 | 正常RIPA 细胞裂解缓冲液(一般是公司购买) |
结合缓冲液binding buffer | 用RIPA 细胞裂解缓冲液代替 |
洗涤缓冲液Washing buffer | PBST(1*PBS + 1% Triton X-100) |
洗脱缓冲液Elution buffer | 直接加入1*蛋白loading buffer, 98oC 5 min后弃去磁珠后，收集上清液检测。 |
常见问题及对策
常见问题 | 原因 | 解决方法 |
高的背景条带 | 蛋白非特异结合到抗体， 磁珠或EP管上洗涤次数不够 | 对裂解液进行预处理去除非特异蛋白； 在最后一次洗涤前, 转移整个样品到新的EP管中然后进行离心。 |
洗涤次数不够 | 增加洗涤的时间和次数。 | |
无蛋白条带 | Flag标签蛋白没有表达 | 确保目的蛋白带有Flag标签； 制备新鲜的裂解液； 使用恰当的蛋白酶抑制剂。 |
孵育时间不足 | 增加孵育时间。 | |
样品中存在干扰物质 | 裂解液中存在高浓度的DTT，2-mercaptoethanol或者其他的还原剂； |
